دانشجویان مواد دانشگاه تجن

گرچه منزل بس خطرناک است و مقصد بس بعید، هیچ راهی نیست که آن را نیست پایان، غم مخور

دانشجویان مواد دانشگاه تجن

گرچه منزل بس خطرناک است و مقصد بس بعید، هیچ راهی نیست که آن را نیست پایان، غم مخور

روش های کشت باکتری

آزمایش: انواع کشت باکتری

هدف: تفهیم روش ها، مراحل کشت باکتری و بررسی رشد آن ها 

به نام خدای علم و اندیشه


مقدمه:

محیط کشت:

از آن جا که میکروب یک موجود تک سلولی بوده و قادر است کلیه اعمال حیاتی خود را مستقلا انجام دهد بدون آن که نیاز به سلول دیگری داشته باشد. این اصل بیانگر آن است که میکروب ها هم احتیاج به غذا و آب و مواد آلی و معدنی دارند. محیطی مغذی که حاوی کلیه احتیاجات یک میکروب اعم از مواد غذایی و عناصر و غیره باشد که موجب رشد آن میکروب شود را اصطلاحا محیط کشت می گویند.

این محیط کشت می تواند به صورت دست ساز بوده یا به طور طبیعی یعنی داخل سلول های بدن یک جانور باشد.

میکروب ها را می توان بر روی محیط ها و در ظروف مختلف کشت داد که انتخاب شکل بستگی به نوع کشت دارد. مثلا در کشت هایی که محیط آن مایع است ظروف کشت لوله ای می باشد و محیط های جامد (آگاردار) هم در پلیت و هم در لوله کشت داده می شوند.

انواع کشت باکتری:

1- کشت باکتری در محیط کشت مایع (Broth)

2- کشت باکتری در محیط کشت جامد (Agar)

روش کشت باکتری در محیط کشت مایع:

1- ابتدا یک آنس حلقوی برداشته و آن را در دست راست بگیرید. بعد آن را روی شعله کاملا سترون کنید و بگذارید تا سرد شود.

2- محیط حاوی باکتری (لوله یا پلیت) را در دست چپ بگیرید و درب آن را با دست راست در کنار شعله باز کنید. دقت کنید که درب محیط کشت را روی میز کار خود نگذارید.

3- اگر محیط کشت در لوله است دهانه آنرا چند با ر از روی شعله عبور دهید تا سترون شود همچنین درب لوله را بیش از حد باز نگه ندارید.

4- نوک آنس را وارد محیط کرده و یک لوپ از آنرا بردارید. منظور از لوپ سوزن کشت با نوک حلقه ای است .

5- دهانه لوله را مجددا با شعله سترون کرده و درب آن را بگذارید و محیط کشت را در جای خود قرار دهید.

6- لوله حاوی محیط کشت را در دست چپ بگیرید و نوک آنس آلوده به باکتری مورد نظر را داخل محیط فرو برده و به آرامی تکان دهید تا میکروب ها در محیط پخش شوند.

7- در مواردی که میکروب را از پلیت (محیط کشت جامد) بر می دارید با نوک آنس کمی از پرگنه را برداشته و با رعایت مواردی که گفته شد آن را داخل محیط مایع فرو برده و به آرامی هم بزنید تا همگن شود.

8- دهانه لوله حاوی محیط کشت جدید را با شعله سترون کرده و درب آن را بگذارید و آن را در داخل انکوباتور قرار دهید.

9- نوک آنس را مجددا با شعله استریل کرده و در جای خود قرار دهید.

روش کشت باکتری در محیط جامد:

محیط کشت جامد به دو صورت وجود دارد : 1- محیط کشت جامد در لوله 2- محیط کشت جامد در پلیت

در لوله به دوصورت عمودی ((Stab Culture و شیبدار (Slant Culture) دیده می شود که هر کدام از آن ها روش کشت خاص خود را دارند.

روش کشت عمقی در لوله:

در این حالت محیط کشت آگار دار (جامد) را با حفظ شرایط استریل در حالت مذاب داخل لوله های آزمایش استریل ریخته و به حالت عمودی آن را در یک جای ساکن قرار دهید تا سرد شود در این حالت با آنس نوک تیز استریل شده در کنار شعله از پرگنه باکتری مقداری را برداشته و آن را به صورت عمودی در مرکز این محیط تا انتها فرو برده و بدون هیچ گونه تغییر حالتی آن را از همان مسیر خارج کنید . بعد لوله را در انکوباتور قرار دهید . این روش کشت دارای خصوصیاتی می باشد و آن این است که هنگامی که نوک آنس را در محیط فرو می برید در ابتدای ورود آنس به محیط تراکم باکتری زیاد است و به ترتیب که به عمق محیط فرو می رود از تعداد باکتری ها کاسته می شود تا به انتهای لوله که می رسد تراکم باکتری به حداقل می رسد و از طرفی در انتهای محیط کشت لوله ای اکسیژن کمتر از قسمت سطحی آن است و باکتری ها به ترتیبی که با تراکم وارد محیط شده اند براساس نیاز با اکسیژن (هوازی یا بی هوازی بودن) در محیط رشد متفاوتی دارند. یعنی اگر باکتری هوازی باشد رشد آن در قسمت سطحی بیشتر است و اگر بی هوازی باشد رشد آن در قسمت عمقی بیشتر می شود.

روش کشت در سطح شیبدار در لوله:

در این حالت محیط کشت آگار دار استریل را در لوله های استریل شده ریخته و قبل از سرد شدن آن ها را به حالت شیبدار قرار می دهند تا سرد شوند. در این حالت با آنس سوزنی با حفظ شرایط استریل از پرگنه باکتری برداشته و در کنار شعله نوک آنس را ابتدا به صورت عمودی وارد قسمت عمودی محیط کشت کرده بعد به آرامی آن را از همان مسیر خارج کرده و بدون این که نوک آنس از محیط جدا شود آن را به حالت زیگزاگ روی سطح شیبدار بکشید.

این روش هم خصوصیات بسیار زیادی از جهت تشخیص سویه های باکتری دارد و اطلاعاتی در مورد هوازی یا بی هوازی بودن آن ها و هم چنین خصوصیات منحصر به فرد باکتری ها به ما می دهد. مثلا ممکن است در کشت یک نوع باکتری، رنگ قسمت عمودی محیط کشت تغییر کند که نشانگر بی هوازی یا بی هوازی اختیاری بودن باکتری است که بعدا در تست های اختصاصی دیگر را روی آن انجام می دهیم یا مثلا باکتری ها فقط در قسمت شیبدار رشد می کنند و رنگ آن قسمت تغییر می کند که پی به هوازی بودن آن می برید.

روش دیگر کشت روی این محیط از محیط مایع می باشد که یک لوپ از کشت مایع باکتریایی برداشته و در سطح شیبدار بصورت زیگراک می کشید و کشت می دهید.

روش کشت خطی:

در این روش از محیط پیش ریخته استفاده می شود. به این ترتیب که ابتدا به وسیله یک آنس حلقوی سترون شده مقداری از پرگنه باکتری را برداشته و آن را روی سطح محیط پیش ریخته به صورت خط های موازی و در چند جهت می کشید. در کشت های خطی برای بدست آوردن کلونی های تک می توانید پلیت را به 4 قسمت تقسیم کنید بعد در قسمت اول ابتدا نوک آنس را که محتوی پرگنه باکتری است را به صورت خط های موازی کشیده و بعد خطوط را در منطقه دوم از انتهای خط انتهایی منطقه اول در جهت دیگر ادامه می دهید و در منطقه سوم و چهارم هم به همین صورت عمل می کنید. خصوصیت این روش این است که وقتی خطوط موازی را روی سطح محیط می کشید به ترتیب از تراکم باکتریها کاسته می شود و به انتهای خط که می رسید تراکم باکتری کمتر است و در منطقه دیگر وقتی از انتهای خط منطقه قبلی استفاده می کنید در واقع تراکم بسیار کمتر از تراکم باکتریها در ابتدا می باشد و در نتیجه در مناطق دیگر هم به ترتیب از تعداد باکتری ها کاسته می شود تا جایی که در منطقه چهارم شما می توانید پرگنه های تکی داشته باشید که کلونی خالص نامیده می شود. بنابراین انجام درست کشت خطی منجر به ایجاد کلنی خالص می شود این کلونی تنها از یک باکتری مادری به وجود می آید (تعریف کلونی خالص). باکتری های منفرد را باکتری های مادر می نامند که این باکتری ها پس از کشت خطی و جدا شدن سلول های باکتری از یکدیگر به وجود می آیند.

توجه داشته باشید که کلونی خالص به کلونی گفته می شود که با کلونی دیگر تماس نداشته باشد.

در مورد محیط های کشت باکتریایی که به صورت مایع می باشند برای انجام کشت خطی روی محیط پیش ریخته فقط یک بار لوپ را داخل محیط محتوی باکتری کرده و یک لوپ از آن بردارید سپس آن را روی محیط پیش ریخته قرار داده و به صورت خطوط موازی آن را در چند جهت بکشید و یا مراحل فوق را روی آن انجام دهید.

از آن جا که مراحل کار انجام شده در آزمایشگاه، روش های اصولی و تعریف شده برای آزمایشات می باشد و این مراحل را نیز در آزمایشگاه طبق همان اصول انجام داده ایم، تکرار دوباره ی مباحث بیان شده در گزارش کار لزومی ندارد.

این گروه نیز کشت در محیط مایع، کشت در سطح شیبدار و کشت به روش خطی را در محیط پلیت کانت آگار انجام داده است.

<!--[if !supportLists]-->·     <!--[endif]-->در انجام آزمایشات بر روی محیط کشت جامد سعی شود تا زمان کار بر روی محیط کشت به محیط آسیبی نرسد.

<!--[if !supportLists]-->·     <!--[endif]-->دقت شود تا محیط کشت را به همراه کلونی از محیط کشت قبلی برداشت نکنیم.

<!--[if !supportLists]-->·     <!--[endif]-->شرایط لازم برای نمونه های آماده شده، مدت 48 ساعت و دمای 37 درجه سانتی گراد می باشد.

<!--[if !supportLists]-->·     <!--[endif]-->توجه داشته باشید که این آزمایش را نیز مانند تمام آزمایشات در شرایط استریل و در کنار شعله انجام می شود.

نتیجه:

محیط کشت مایع: در نتیجه این آزمایش می توان تعداد زیادی از انواع باکتری از قبیل هوازی، بی هوازی و آئروفیل را مشاهده کرد.

محیط کشت جامد:

کشت عمقی در سطح شیبدار: تعداد زیادی کلونی های رشد یافته را می توان دید که به رنگ کرم می باشند و هم چنین باکتری هایی به رنگ زرد پر رنگ نیز در سطح محیط وجود دارند.

کشت خطی: کلونی های رشد یافته را می توان مشاهده کرد و هم چنین در این نمونه یک کلونی خالص مشاهده می شود.

خطای آزمایش:

برداشت نادرست کلونی یا انجام روش نادرست کشت باکتری ها به وی‍ژه در روش خطی می تواند در نتیجه ی آزمایش اختلال ایجاد می کند.

منبع: www.azmayeshat.mihanblog.com        


شرایط لازم برای نمونه های آماده شده، مدت 48 ساعت و دمای 37 درجه سانتی گراد می باشد./p dir=

آماده سازی محیط کشت در ظروف و بررسی میکروارگانیزم های هوازی

آزمایشات: آماده سازی محیط کشت در ظروف و بررسی میکروارگانیزم های هوازی

اهداف: فراهم سازی محیط کشت باکتری ها و هم چنین بررسی وضعیت میکروارگانیزم های موجود در هوا

به نام سرآغاز علم

مقدمه:

تعداد میکرو ارگانیسم های موجود در هوا در مقایسه با خاک و آب بسیار کم بوده و معمولا از نظر متابولیسمی فعال نیستند. در واقع هوا، محیط زیست میکروارگانیسم ها نیست، بلکه تنها محیط و وسیله انتقال فعال میکروبها می ‌باشد.

ژوزف لیستر اولین کسی بود که به اهمیت میکروارگانیزم های موجود در هوا پی برد و بررسی میکروارگانیزم های هوای اطراف نشان می دهد که پس از رها شدن در هوا، بالاخره به لایه سطحی هوا در سطح زمین یا گیاهان باز می گردند و ذخیره می شوند. ذخیره شدن میکروارگانیسم ها در هوای خشک و در باران، به روش های مختلف انجام می شود. مثلا ذخیره شدن در هوای خشک از طریق نشست اسپور ها در اثر نیروی جاذبه در سرعت حرکت کم باد انجام می شود و در این شرایط حائز اهمیت است. هم چنین در ذخیره سازی در باران، قطرات باران می توانند ذرات میکروبی را در خود گرفته و آن ها را به طرف زمین حمل کنند.

انواع و تراکم میکروارگانیسم ها در محیط های باز شهری و خارج از شهر و نیز بر حسب تراکم جمعیت، پوشش گیاهی و فعالیت های انسانی متفاوت است. به طور کلی در محیط های شهری، تعداد باکتری ها بیشتر بوده در حالی که در هوای مناطق روستایی، تعداد باکتری ها از چند صد عدد در هر متر مکعب تجاوز نمی کند .

متداول ترین قارچ های هوا دوترومیست ها، کلادوسپوریوم، بازیدیومیست ها، اسپوروبلومیس است و فراوانترین آنها بازیدیومیست ها هستند .

به طور کلی تراکم میکروارگانیسم ها به ویژه اسپورهای قارچی در هوا بر حسب فصل سال، شرایط آب و هوایی، تغییرات درجه حرارت و رطوبت، میزان بارندگی و جریان هوا متفاوت است. آلودگی هوا با گوگرد منجر به افزایش تعداد میکروبها می شود اما در مقابل وجود ترکیبات و فلزات سنگین در هوا، از جمله گرد و غبار صنایع فلز کاری، در مقیاس کوچک و احتمالا سرب حاصل از دود اتومبیل منجر به کاهش تعداد میکروبها می شود.

گزارش:

1) آماده سازی محیط کشت در ظروف: (نمونه ی جامد (agar)) آماده سازی محیط کشت در پلیت و هم چنین لوله های آزمایش انجام می شود.

الف) آماده سازی در پلیت:

ابتدا مقداری از نمونه را برداشته (25-20 میلی لیتر) و مقداری از درب پلیت را به آرامی باز می کنیم (نیم باز کرده) و مقدار تعیین شده را در پلیت می ریزیم و سپس بر روی میز آزمایش قرار داده و به شکل عدد هشت انگلیسی دوران می دهیم. قابل توجه است که در هنگام دوران نمونه ی موجود در پلیت نباید با درب پلیت برخورد کند. عمل دوران را جند بار انجام داده تا محیط کشت در تمام سطح پلیت به طور یکنواخت پخش شود و محیط کشت پس از آماده سازی باید برعکس قرار بگیرد، زیرا پس از ریختن محیط کشت و بستن درب پلیت به علت دمای بالای محیط کشت، بخار هایی ایجاد شده و اگر به همان شکل، مستقیم پلیت را قرار دهیم، پس از طی زمان اندکی بخارات به محیط کشت برگشت می کند و موجب تخریب محیط کشت می شوند.

ب) آماده سازی در لوله های آزمایش:

نمونه های محیط کشت در لوله های آزمایش به دو صورت عمودی (stab culture) و شیب دار (stant culture) قرار می گیرند و نمونه های آزمایشگاهی نیز با ریختن نمونه به لوله ی آزمایش آماده می شوند. تنها باید در نحوه ی قرار دادن لوله ی آزمایش پس از ریختن نمونه دقت کرد تا با توجه به خواسته ی ما از سطح نمونه ی موجود، لوله ی آزمایش را عمودی و یا شیب دار در مکانی ثابت قرار دهیم تا محیط کشت شکل بگیرد. پس از ریختن نمونه در لوله ی آزمایش سر آن را باید با پنبه ی استریل و فویل آلومینیومی ببندیم تا مانع از ورود باکتری ها به محیط کشت شویم.

2) بررسی میکروارگانیزم های موجود در هوا:

پس از آماده سازی محیط های کشت در پلیت ها، 6 پلیت برداشته و به ترتیب به صورت زیر آماده سازی می شود:

A') نمونه ی شاهد: محیط کشت به همان شکل و بدون هیچ گونه عملی دست نخورده باقی می ماند.

B') هوای آزاد: محیط کشت پس از ریخته شدن در پلیت و برداشتن درب پلیت مستقیما در مجاورت هوا به مدت 15 تا 20 دقیقه قرار می گیرد.

C) (گروه A) دست کثیف: باید انگشت یا قسمتی از دست را آرام بر روی محیط کشت کشید، بدون این که به محیط کشت آسیبی برسد.

D) (گروه B) دست تمیز: قبل از آزمایش دست را باید تمیز شست و سپس مطابق نمونه C عمل کرد.

E) (گروه C) سرفه کردن: همان طور که مشخص است چند بار بر روی محیط کشت عمل سرفه کردن را انجام می دهیم.

F) (گروه D) لباس: به کمک آنس (باید توجه کرد که آنس را قبل از آزمایش استریل کرد که این عمل با قرار دادن سر آن در مرکز شعله و به زاویه ی 45 درجه انجام می گیرد و برای خنک کردن آن نیز سر آن را در گوشه ای از محیط کشت نگه داشته تا دمای آن کاهش یابد) ابتدا سر آن را بر قسمتی از لباس می کشیم و سپس به صورت زیگزاگ بر روی نمونه ی محیط کشت می کشیم.

پس از انجام عملیات بالا، نمونه ها را به مدت 24 ساهت و در دمای 37 درجه سانتیگراد در انکوباتور می گذاریم (به صورت وارونه). پس از گذشت زمان تعیین شده نمونه ها را برداشته و با کمک نمونه های A' و B' موارد زیر را تعیین می کنیم.


نمونه
تعداد کلونی
رنگ
حالت

A
0
-
-

B
بیش از نیمی از پلیت
کرم
لزج

C
بیش از 80
کرم
کروی

D
بیش از 30
کرم
کروی و لزج

E
بیش از 100
کرم روشن
لزج

F
1
کرم
کروی




· باکتری ها در حالت لزج تا حدودی با مشکل شمارش مواجهند.

· انکوباتور دستگاهی است که پلیت های محیط کشت در آن قرار می گیرند و تامین کننده دمای مورد نیاز میکروارگانیزم ها برای رشد می باشد.

· قابل توجه است که مانند تمام آزمایشات میکروبیولوژی این آزمایش نیز باید در شرایطی استریل و در کنار شعله انجام شود.

نتیجه: آزمایشات میکروبیولوژی هر کدام دارای مراحل خاصی است که برای رسیدن به هدف مورد نظر باید درست انجام شوند و آماده سازی محیط کشت نیز از اهمیت بالایی برخوردار است و میکروارگانیزم های موجود در هوا در هر سطحی دارای وضعیت های گوناگونی می باشند و کشت درست و دقیق آن ها نیز در بررسی های میکروبی نقش مهمی دارد.

خطای آزمایش: خطای آزمایشات را می توان در شمارش نا درست کلونی ها و در حالت کلی بررسی اشتباه میکروارگانیزم ها اعلام کرد و هم چنین انجام نا درست مراحل فراهم آوری محیط کشت که هر کدام به نوبه ی خود می توانند در آزمایش اختلال ایجاد کنند.




منبع www.lenjan.ir

www.biolougy120.blogfa.com

www.daneshnameh.roshd.ir

آماده سازی محیط کشت

آزمایش: آماده سازی محیط کشت

هدف: فراهم آوری محیط کشت باکتری ها برای آزمایشات

به نام خدایی که کائنات را برای انسان معما ساخت

مقدمه:

روش تهیه محیط های کشت :

مطابق دستور کارخانه سازنده و با توجه به بروشور الصاقی روی آن می توان مقدار لازم از محیط کشت که به صورت پودری یا پلیت شده می باشد را برداشته و با مقدار توصیه شده آب مقطر در داخل ارلن مخلوط کنید بعد آن را با توجه به دستور کارخانه اگر لازم بود روی شعله قرار داده تا بر اثر حرارت شفاف شود که البته در بعضی از محیط ها نیازی به این کار نیست. بعد آن را در اتوکلاو قرار داده و به مدت 15 دقیقه در دمای 121 درجه سانتیگراد قرار می دهید تا استریل شود. بعضی از محیط های کشت که به دمای بالا حساس می باشند در اتوکلاو قرار نمی گیرند و این مسئله را کارخانه سازنده حتما متذکر شده است. بعد از اتوکلاو گذاری محیط های کشت آگار دار داخل ارلن سفت می شود و برای استفاده از آن ها باید دوباره حرارت داده شوند ولی محیط های کشت مایع به شکل مایع باقی می مانند و آماده مصرف هستند.


گزارش کار: آماده سازی محیط کشت (پلیت کانت آگار (plate count agar (pca)))

به طور معمول آماده سازی از طریق اطلاعاتی که بر روی ظرف و بسته بندی محیط های کشت درج شده است استفاده می شود. ابتدا مقدار تعیین شده محیط کشت را با ترازو اندازه گیری کرده و در یک ارلن با مقدار یک لیتر آب مقطر ترکیب می نماییم. (بری محیط کشت pca مقدار 23.5 گرم در حجم یک لیتر آب مقطر در نظر گرفته شده است که این عمل را در آزمایشگاه با مقدار 5.8 گرم pca و 250 میلی لیتر آب مقطر در ارلنی با حجم 250 میلی لیتر ترکیب می کنیم(. عمل ترکیب سازی توسط یک همزن شیشه ای انجام می شود و تا آن جایی پیش می رود که ترکیب موجود در ارلن کاملا یکنواخت گردد و برای بهتر حل شدن نیز می توان ارلن را در بن ماری (حمام آب گرم) قرار داد. توجه داشته باشید که در زمان تقابل نمونه ی موجود در ارلن و حرارت، باید نمونه مرتب هم زده شود. سپس ارلن را پس از ترکیب سازی نمونه موجود را برداشته و بوسیله ی تکه ای فویل آلومینیومی و پنبهی استریل سر ارلن را میبندیم و در اتوکلاو استریل می نماییم. شرایط اتوکلاو نیز برای استریلیزاسیون باید مطابق با شرایط زیر باشد:

دما: 121 درجه سانتیگراد / زمان: 15 دقیقه / فشار: 1.2atm، 1.2bar، 15pb/inch2

· تنظیم فشار در دستگاه اتوکلاو به طور خودکار زمانی که شرایط دیگر مساعد و درست باشد، تنظیم می گردد.

در محیط کشت مایع (broth)، مراحل اولیه مطابق شرایط بالا طی شده و در زمان هم زدن ابتدا در لوله های آزمایش به نسبت های مساوی ریخته شده و سپس در بن ماری برای ترکیب سازی قرار می گیرد. لوله های آزمایش سرشان با استفاده از پنبه و فویل آلومینیومی بسته شده و در اتوکلاو با توجه به شرایط مناسب کشت استریل می شود.

پس از عمل استریلیزاسیون، نمونه ی موجود در اتوکلاو (نمونه کاملا شفاف می شود) در پلیت ریخته شده و باکتری ها را روی آن کشت می دهیم. محیط های کشت مایع نیز به همین صورت از طریق لوله های آزمایش به پلیت منتقل می شود.



روش کار دستگاه اتوکلاو:

دستگاه اتوکلاو، دستگاه حرارت مرطوب (بخار آب) می باشد و دارای یک مخزن داخلی می باشد که در این مخزن سه پایه بر روی جداره ی آن تعبیه شده و دیگی آلومینیومی بر روی آن ها و دستگاه اتوکلاو قرار می گیرد. که در این دیگ نمونه ی آزمایش جای داده می شود. در مخزن زیرین آب قرار می گیرد تا با استفاده از حرارت دادن و بخار آب شرایطی مناسب برای استریل اتفاق بیافتد. قابل توجه است که آب موجود در اتوکلاو باید در سطحی زیر سه پایه ی موجود باشد. سپس با قرار دادن نمونه در دیگ آلومینیومی و قرار دادن دیگ بر روی پایه ها، درب اتوکلاو را بسته و پیچ های آن را محکم می کنیم و سپس از طریق قسمت تنظیمات شرایط را برای استریل تنظیم می کنیم.

تنظیم کردن اتوکلاو: پس از روشن کردن دستگاه، ابتدا دکمه ی mode را فشار داده و سپس از طریق دکمه های جهت بالا و پایین دما را تنظیم می کنیم و دکمه ی save را می زینم حال زمان را تنظیم می کرده و دوباره دکمه ی save را می زنیم و سپس دکمه ی mode و دستگاه شروع به کار می کند.

پس از شروع کار چراغ heather (قرمز رنگ) روشن و چراغ wk (آبی رنگ) که نشان دهنده ی میزان مناسب آب (water ok) نیز روشن می شود. پس از رسیدن دستگاه به حد مناسب، چراغ streal (زرد رنگ) روشن می شود و زمان تعیین شده به کار می افتد و زمانی که به صفر می رسد، دکمه end (سبز رنگ) روشن می شود.

بر روی درب دستگاه اتوکلاو، یک خروجی تخلیه ی بخار وجود دارد که بعد از عمل استریل آرام آرام آن را باز کرده تا فشار موجود در دستگاه خارج شود (نشان گر فشار بخار دستگاه بر روی درب آن قرار دارد) و به صفر برسد، پس از به صفر رسیدن صبر می کنیم تا زمانی که دما به 95 درجه سانتی گراد برسد و حال می توان درب را باز کرده و نمونه را بیرون بیاوریم و از آن استفاده کنیم.(صبرلازم برای خارج کردن نمونه جهت پیش گیری از سوختن و کاهش دمای زیاد نمونه می باشد)

نتیجه:

یادگیری روند آماده سازی محیط کش از ملزومات آزمایشات میکروبی که در این سطح انجام می شود، می باشد و مرحله ای مهم در کشت و پرورش میکروب ها می باشد.

خطای آزمایش:

اندازه گیری نا مناسب میزان تعیین شده ی مواد و هم چنین تنظیم نا صحیح دستگاه اتوکلاو و ترکیب نا صحیح نمونه موجب اختلال در روند آماده سازی محیط کشت می شود.

· توجه کنید که این آزمایش نیز مانند تمام آزمایشات میکربیولوژی باید در شرایط استریل انجام شود.

منبع: www.azmayeshat.mihanblog.com

رقیق سازی

آزمایش: رقیق سازی

هدف آزمایش: رقیق سازی نمونه ها برای کاهش بار میکروبی و شمارش بهتر میکروب ها



به نام خدایی که عاشقم فرمود از برای علم

مقدمه:

آماده سازی نمونه و تهیه رقت های مختلف

v آماده نمودن نمونه های مختلف:

§ نمونه‌های منجمد و فریز: نمونه‌های منجمد قبل از آزمایش به یکی از دو روش زیر دیفراست و سپس از آن ها رقت ها ساخته می ‌شود.

الف) نمونه به مدت 18 تا 24 ساعت در دمای یخچال 2 تا 5 درجه سانتیگراد.

ب) نمونه‌ای که به سهولت از انجماد خارج می شود بمدت 15 دقیقه در دمای 35 درجه سانتیگراد.

§ نمونه‌های غذایی مایع: قبل از آزمایش و تهیه رقت به خوبی تکان داده و هموژن و یکنواخت گردد و در زمان باز کردن در ظرف باید از آلوده شدن آن اجتناب شود لذا باید آن ناحیه قبلاً ضد عفونی شود.

§ نمونه‌های غذاهای بسته بندی شده مانند ظروف و قوطی های کنسرو و غیره باید سطوح خارجی و محل باز کردن توسط شعله و یا الکل و یا هوای داغ ضد عفونی گردد.

§ مواد غذایی خشک و پودری نیز با دقت ناحیه خاص کوچکی از آن جهت برداشت بازگردد.

v در تهیه رقت‌ها رعایت شرایط استریل الزامی بوده و در خرد و یکنواخت و هموژن کردن نمونه با رقیق کننده ها چنانچه از مخلوط کن یا استوماکر استفاده می شود باید سعی شود تا از آسیب های مکانیکی و گرمای ایجاد شده با کم کردن مدت هموژنیزاسیون از آن جلوگیری نمود ضمناً از مواد غذایی جامد و نیمه جامد مانند گوشت مرغ ماهی و فرآورده های آن پنیر و غیره در صورت لزوم از قسمتهای خارجی، میانی و عمقی برداشت شود تا درتفسیر نتایج مشکلی پیش نیاید. جهت باز کردن قوطی های کنسرو باید یک قیف واژگون استریل را متناسب با در قوطی در آن گذارده و سپس یک میله فلزی استریل بلندی را در جهت باریک قیف داخل کرده و توسط ضربه قوطی را سوراخ نمود.

v ترکیب رقیق کننده‌ها: مهم ترین رقیق کننده‌ها شامل آب نمک 5/8 در هزار (سرم فیزیولوژی) بافرها فسفاته و محلول رینگر 4/1 است ولی چون این محلول ها در زمان طولانی برای میکرو ارگانیسم‌ها زیان آور است لذا بهتر است از رقیق کنند‌هایی که کمتر برای میکرو ارگانیسم‌ها زیان آور است استفاده شود که بهترین آن ها آب پیتونه 1/0 می باشد اینک جهت آگاهی به ترکیب و نحوه ساخت رقیق ‌کننده‌های مهم اشاره می‌شود.

§ محلول رینگر 4/1: کلرید سدیم 9 گرم + کلرید پتاسیم 42/0 گرم + کلرید کلسیم 48/0 گرم+ بی کربنات سدیم 24/0 گرم در حجم 4 لیتر آب مقطر که در دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه استریل می ‌گردد، pH محلول نهایی باید 7 باشد.

§ آب پیتونه: پیتن 10 گرم + کلرید سدیم 5 گرم در حجم یک لیتر با آب مقطر کهpH در 7 تنظیم گردد و سپس در دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه استریل گردد.

§ محلول بافر فسفات ذخیره : 34 گرم دی هیدروژن فسفات پتاسیم + 500 میلی لیتر آب مقطر که محلول به کمک سود نرمال pHآن بر روی 7 تنظیم گردد و سپس با آب مقطر حجم به یک لیتر رسانده و در دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه استریل گردد، حال جهت تهیه محلول رقیق شده بافر فسفات 25/1 میلی لیتر از بافر فسفات ذخیره را با آب مقطر به حجم یک لیتر می‌ رسانند و سپس در دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه استریل می‌ نمایند.

§ سرم فیزیولوژی: مقدار 5/8 گرم کلرید سدیم خالص را با آب مقطر به حجم یک لیتر رسانده و در دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه استریل می‌ نمایند.

v تهیه رقت‌های اعشاری: معمولا 10 گرم از نمونه مورد آزمایش را با 90 میلی لیتر رقیق کننده در استوماکر به صورت سوسپانسیون درآورده که جهت این عمل ابتدا مخلوط کن با سرعت کم و تدریجا به مدت 1 تا 2 دقیقه با سرعت بالا عمل مخلوط کردن را ادامه می ‌دهند تا مخلوط یکنواختی از نمونه با رقت 10/1 به دست آید. برای رقت‌های بعدی تعداد لازم لوله ‌های آزمایش حاوی 9 میلی لیتر مایع رقیق کننده را به ترتیب با برداشت یک میلی لیتر از رقت 10/1 و افزودن به اولین لوله رقت 100/1 به دست خواهد آمد سپس یک میلی لیتر از رقت 100/1 به لوله دوم اضافه کرده رقت 1000/1 حاصل شده و به همین ترتیب رقت های بعدی در صورت نیاز ساخته خواهد شد.



گزارش کار: عمل رقت در مقیاس 4-10 به وسیله ی سه نمونه ی شیر، نوشابه، کیک

در این آزمایش سه نمونه ی شیر، نوشابه و کیک در اختیار گروه ها قرار گرفته و نمونه ی شیر برای این گروه تعیین شده است. در فرایند رقت سازی نمونه ها، باید نمونه ها آماده شوند (همگن شوند) که این عمل در نمونه های جامد با پودر کردن و در نمونه های مایع با تکان دادن و به لرزش در آوردن نمونه انجام می شود.

نمونه ی شیر نیز به عنوان مایع تکان داده شده تا همگن شود (در نمونه ی نوشابه برای از بین بردن گاز موجود در آن، مقداری از نمونه را در لوله ی آزمایش قرار داده و بوسیله ی دستگاه شیکر، گاز آن را خارج می کنیم. نمونه ی کیک نیز باید بوسیله ی هاون کوبیده شود).

· قابل توجه است که باید عمل رقیق سازی در محیطی استریل انجام شود و قبل از انجام آزمایش محیط و ابزار را بوسیله ی الکل استریل کرد. این آزمایش نیز باید در کنار شعله انجام شود.

حال ارلنی برداشته و در آن 10 میلی لیتر از نمونه ی شیر را قرار داده و سپس 90 میلی لیتر آب مقطر که به عنوان یک مایع رقیق کننده است به آن اضافه می شود (اندازه گیری آب مقطر به وسیله ی استوانه ی مدرج و نمونه ی مایع بوسیله پیپت و پوار با توجه به سطح برداشت و نمونه ی جامد به وسیله ترازو انجام می شود). سپس نمونه و آب مقطر را تکان داده تا ترکیب شود (پس از ترکیب کردن نمونه ی جامد با آب مقطر ابتدا باید صبر کرد تا مواد جامد و پودری رسوب کند و سپس از قسمت شفاف نمونه استفاده کرد) حال نمونه ی رقت 1-10 را آماده کرده ایم.

حال به وسیله ی پیپت و پوار 1 میلی لیتر از نمونه و 9 میلی لیتر آب مقطر را برداشته و در یک لوله ی آزمایش قرار می دهیم و تکان می دهیم که رقت 2-10 را تهیه کرده ایم. حال از رقت حاضر طبق روش قبل رقت 3-10 و از رقت جدید، رقت 4-10 را تهیه می کنیم. ادامه این روند رقت های بعدی را نیز بدست می دهد.



نتیجه:

در عمل رقیق سازی زمانی که نمونه ی رقت شده را بر روی پلیت کشت می دهیم، پس از عمل کشت و نمایان شدن کلونی ها، تعداد باکتری های نمونه اصلی را اندازه گیری می کنیم که با روش زیر محاسبه می شود:

عکس رقت x تعداد باکتری های موجود در رقت مورد آزمایش = تعداد باکتری های نمونه اصلی

مثال: اگر 3 کلونی بر روی پلیت نمایان شود، تعداد باکتری ها در رقت 4-10 برابر است با 410 x3 می باشد.



خطای آزمایش:

خطای این آزمایش زمانی است که نمونه ها را برداشت می کنیم روی می دهد و احتمال برداشت کمتر و بیشتر نمونه ها وجود دارد که می تواند تاثیری بر آزمایش داشته باشد.

منبع: www.arm1354.blogfa.com

پایان

به پایان آمد این دفتر حکایت هم چنان باقیست

اصلاح ژنتیکی ارگانیسم

Genetically modified organism

A genetically modified organism (GMO) or genetically engineered organism (GEO) is an organism whose genetic material has been altered using genetic engineering techniques. These techniques, generally known as recombinant DNA technology, use DNA molecules from different sources, which are combined into one molecule to create a new set of genes. This DNA is then transferred into an organism, giving it modified or novel genes. Transgenic organisms, a subset of GMOs, are organisms which have inserted DNA that originated in a different species.

Production

Genetic modification involves the insertion or deletion of genes. When genes are inserted, they usually come from a different species, which is a form of horizontal gene transfer. In nature this can occur when exogenous DNA penetrates the cell membrane for any reason. To do this artificially may require attaching the genes to a virus or just physically inserting the extra DNA into the nucleus of the intended host with a very small syringe, or with very small particles fired from a gene gun. However, other methods exploit natural forms of gene transfer, such as the ability of Agrobacterium to transfer genetic material to plants, or the ability of lentiviruses to transfer genes to animal cells.

Uses

GMOs are used in biological and medical research, production of pharmaceutical drugs, experimental medicine (e.g. gene therapy), and agriculture (e.g. golden rice). The term "genetically modified organism" does not always imply, but can include, targeted insertions of genes from one species into another. Such methods are useful tools for biologists in many areas of research, including those who study the mechanisms of human and other diseases or fundamental biological processes in eukaryotic or prokaryotic cells.

To date the broadest and most controversial application of GMO technology is patent-protected food crops which are resistant to commercial herbicides or are able to produce pesticidal proteins from within the plant, or stacked trait seeds, which do both. The largest share of the GMO crops planted globally are owned by the US firm Monsanto. In 2007, Monsanto's trait technologies were planted on 246 million acres (1,000,000 km2) throughout the world, a growth of 13 percent from 2006.

In the United States, the United States Department of Agriculture (USDA) reports on the total area of GMO varieties planted. According to National Agricultural Statistics Service, the states published in these tables represent 81–86 percent of all corn planted area, 88–90 percent of all soybean planted area, and 81–93 percent of all upland cotton planted area (depending on the year).

USDA does not collect data for global area. Estimates are produced by the International Service for the Acquisition of Agri-biotech Applications (ISAAA) and can be found in the report, "Global Status of Commercialized Transgenic Crops: 2007".

Transgenic animals are also becoming useful commercially. On February 6, 2009 the U.S. Food and Drug Administration approved the first human biological drug produced from such an animal, a goat. The drug, ATryn, is an anticoagulant which reduces the probability of blood clots during surgery or childbirth. It is extracted from the goat's milk.

Detection

Testing on GMOs in food and feed is routinely done by molecular techniques like DNA microarrays or qPCR.

To avoid any kind of false positive or false negative testing outcome, comprehensive controls for every step of the process is mandatory. A CaMV check is important to avoid false positive outcomes based on virus contamination of the sample.

Transgenic microbes

Bacteria were the first organisms to be modified in the laboratory, due to their simple genetics. These organisms are now used for several purposes, and are particularly important in producing large amounts of pure human proteins for use in medicine.

Genetically modified bacteria are used to produce the protein insulin to treat diabetes. Similar bacteria have been used to produce clotting factors to treat haemophilia, and human growth hormone to treat various forms of dwarfism.

Transgenic animals

Some chimeras, like the blotched mouse shown, are created through genetic modification techniques like gene targeting.

Transgenic animals are used as experimental models to perform phenotypic and for testing in biomedical research. Other applications include the production of human hormones such as insulin.





Fruit flies

In biological research, transgenic fruit flies (Drosophila melanogaster) are model organisms used to study the effects of genetic changes on development. Fruit flies are often preferred over other animals due to their short life cycle, low maintenance requirements, and relatively simple genome compared to many vertebrates.

Mammals

Genetically modified mammals are an important category of genetically modified organisms. Transgenic mice are often used to study cellular and tissue-specific responses to disease.

In 1999, scientists at the University of Guelph in Ontario, Canada created the genetically engineered Enviropig™. The Enviropig excretes from 30 to 70.7% less phosphorus in manure depending upon the age and diet. In February 2010, Environment Canada determined that Enviropigs are in compliance with the Canadian Environmental Protection Act and can be produced outside of the research context in controlled facilities where they are segregated from other animals.

In 2009, scientists in Japan announced that they had successfully transferred a gene into a primate species (marmosets) and produced a stable line of breeding transgenic primates for the first time.

Fish

Genetically modified fish have promoters driving an over-production of "all fish" growth hormone. This resulted in dramatic growth enhancement in several species, including salmonids, carps and tilapias.

Gene therapy

Gene therapy, uses genetically modified viruses to deliver genes that can cure disease into human cells. Although gene therapy is still relatively new, it has had some successes. It has been used to treat genetic disorders such as severe combined immunodeficiency, and treatments are being developed for a range of other currently incurable diseases, such as cystic fibrosis, sickle cell anemia, and muscular dystrophy. Current gene therapy technology only targets the non-reproductive cells meaning that any changes introduced by the treatment can not be transmitted to the next generation. Gene therapy targeting the reproductive cells—so-called "Germ line Gene Therapy"—is very controversial and is unlikely to be developed in the near future.

Transgenic plants

Transgenic plants have been engineered to possess several desirable traits, including resistance to pests, herbicides, or harsh environmental conditions; improved product shelf life, and increased nutritional value. Since the first commercial cultivation of genetically modified plants in 1996, they have been modified to be tolerant to the herbicides glufosinate and glyphosate, to be resistant to virus damage as in Ringspot virus resistant GM papaya, grown in Hawaii, and to produce the Bt toxin, a potent insecticide. Most of transgenic varieties grown today are known as first generation transgenics, because the transgenic trait provides benefits to farmers. Plants of the second generation should directly benefit the consumer with nutritional enhancement, taste, texture, etc. In January 2008, scientists altered a carrot so that it would produce calcium and become a possible cure for osteoporosis; however, people would need to eat 1.5 kilograms of carrots per day to reach the required amount of calcium.

The coexistence of GM plants with conventional and organic crops has raised significant concern in many European countries. Since there is separate legislation for GM crops and a high demand from consumers for the freedom of choice between GM and non-GM foods, measures are required to separate foods and feed produced from GMO plants from conventional and organic foods. European research programs such as Co-Extra, Transcontainer, and SIGMEA are investigating appropriate tools and rules. At the field level, biological containment methods include isolation distances and pollen barriers.
ترجه در ادامه مطلب
SOURCE: http://en.wikipedia.org/wiki/Genetically_modified_organism
br / ادامه مطلب ...

شروع ترم جدید

روز از نو روزی از نو، مثل اینکه حرارت وجودی هم رشته ای های عزیز در حال بر افروختن آتش دوستی است. اشتباه نکنید. آتش، مقدس است و بخشی ازعناصر تشکیل دهنده ی این هستی است که می توان به گرمی آن، رنگ آن، شکل خاص آن اشاره کرد که محفل ما نیز این گونه خواهد بود.

یعنی گرم، شکل خاص خود که تازگی آن جذابیت ایجاد می کند و رنگی بودن آن نه به معنی چند رنگی بلکه به معنی یکنواخت نبودن آن، لذت بخش روزگار پیش روی ماست که باید با توانی مضاعف نسبت به گذشته آن را پشت سر گذاشت تا بتوان با استفاده از این موقعیت، زندگی را بر روی قله های موفقیت ساخت.

آری این زندگی ماست.

اشک

اشک، بارشی آرام که در تمام هستی رخ می دهد. حال هر دم با لرزه ای بر دیدگانم، بارش آغاز می شود و قطره های اشک هم ساز با بارش قطره های باران از ابرهای آسمان می رقصد گونه هایم را تر می کند و زمانی پایان می یابد که نسیمی از نفست بلند گردد و دیدگانم را آرام کند.

لحظه ی دیدار

قطره قطره بارش باران
ز ابر های پیوسته ی آسمان
گویی مثال اشکهای چشمانمان
از برای دلتیگی دیدار دوستان
ذره ذره گرمایش سرزمینمان
با آمدن بهار و رفتن زمستان
گویی مثال شوق بیشتر دل برای یاران
با رسیدن لحظه ی دیدار و گذر زمان